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免疫組化切片注意事項

發布時間: 2017-01-17  點擊次數: 2638次

   切片(pian)(pian)(pian)組(zu)織得到(dao)很好處理(li)(li)后在(zai)進(jin)行(xing)切片(pian)(pian)(pian)之前還應對玻璃(li)片(pian)(pian)(pian)進(jin)行(xing)處理(li)(li),由于(yu)我們檢測抗(kang)原(yuan)是多(duo)種多(duo)樣(yang)的,因(yin)染色操作(zuo)程序復(fu)雜,時(shi)間較長(chang),有(you)些抗(kang)原(yuan)是要(yao)(yao)進(jin)行(xing)各種抗(kang)原(yuan)修(xiu)復(fu)處理(li)(li),如(ru)(ru)微波、高壓、水溶酶(mei)等,玻片(pian)(pian)(pian)如(ru)(ru)果得不(bu)到(dao)很好的處理(li)(li),將易造(zao)成脫片(pian)(pian)(pian),為保證免(mian)疫組(zu)化實驗的正常進(jin)行(xing),要(yao)(yao)求在(zai)貼片(pian)(pian)(pian)前對載玻片(pian)(pian)(pian)作(zuo)適當處理(li)(li),必(bi)須在(zai)清洗干凈的玻片(pian)(pian)(pian)上進(jin)行(xing)粘合劑的處理(li)(li)以防脫片(pian)(pian)(pian)。
1)Poly-L-Lysine 
一般采用分子(zi)量30000左右的(de)0.5%多聚賴氨(an)酸,也可用試(shi)劑公司出(chu)售的(de)其濃溶液以1:10去離子(zi)水稀釋。方法是將玻片(pian)浸(jin)泡其中(zhong),傾盡(jin)余(yu)液,在60℃溫箱中(zhong)烤(kao)干備(bei)用,此方法的(de)優點是可以用于多種組織(zhi)化學、免(mian)疫組化及分子(zi)學檢測(ce)中(zhong)的(de)應(ying)用,粘貼效果,但價格稍(shao)貴。
2)明膠硫酸鉻鉀法
將(jiang)2.5g明膠(jiao)加熱溶于(yu)500ml蒸餾水中,*溶解冷卻后加入(ru)0.25g硫(liu)酸鉻鉀攪勻充分溶解即可使(shi)用(yong)。方(fang)法是將(jiang)玻(bo)片浸泡(pao)其中2 min,取(qu)出控盡液(ye)體入(ru)溫(wen)箱中烤干備(bei)用(yong)。此(ci)法價格便宜、方(fang)法簡單,任何(he)實驗都可以(yi)使(shi)用(yong),特別適用(yong)于(yu)大批(pi)量的(de)使(shi)用(yong),但應注意,如果液(ye)體變藍或粘(zhan)稠狀(zhuang)停用(yong)。
3)APES (3-氨丙基(ji)-乙氧基(ji)甲硅烷)
此法必(bi)須現用現配。將(jiang)洗凈玻片(pian)(pian)入1:50丙酮稀釋的APES中,浸泡20s,取出稍停再入丙酮或蒸(zheng)餾水中刷去末(mo)結(jie)合的APES晾干(gan)即可。用此方法粘合的玻片(pian)(pian)應垂直烤(kao)片(pian)(pian)不能(neng)平拷,否則組織片(pian)(pian)中易(yi)出現氣泡。
  切(qie)(qie)片(pian)(pian)必須保持切(qie)(qie)片(pian)(pian)刀(dao)銳利,切(qie)(qie)片(pian)(pian)要薄而(er)(er)平整、無皺摺(zhe)、無刀(dao)痕,如有上述問(wen)題(ti)的(de)切(qie)(qie)片(pian)(pian)在進行(xing)免疫組化染色都將出(chu)現假陽性(xing)現象(xiang),切(qie)(qie)片(pian)(pian)厚度(du)(du)一(yi)(yi)般為3~4μm,切(qie)(qie)好的(de)切(qie)(qie)片(pian)(pian)在60℃溫箱中過一(yi)(yi)夜,注意烤片(pian)(pian)的(de)溫度(du)(du)不宜(yi)過高,否(fou)則(ze)易使組織細胞結構(gou)破壞(huai),而(er)(er)產生抗原(yuan)標(biao)記定(ding)位彌漫現象(xiang)。

 

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