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大鼠芳香酶(ARO)ELISA試劑盒大促!

發布時間: 2018-04-25  點擊次數: 1643次

大鼠芳香酶(ARO)ELISA試劑盒大促!

產品簡介:

芳(fang)香化(hua)(hua)(hua)酶(mei)(mei)(aromatase, CYP19)是(shi)細胞色素(su)(su)P450酶(mei)(mei)系(xi)中的(de)(de)一(yi)種, 可以(yi)催化(hua)(hua)(hua)雄(xiong)烯二(er)酮(tong)、睪酮(tong)脫(tuo)(tuo)去19位碳(tan)并使A環(huan)芳(fang)構化(hua)(hua)(hua), 分(fen)別形成(cheng)(cheng)雌二(er)醇(chun)(chun)和雌酮(tong), 它是(shi)雌激(ji)素(su)(su)生物合成(cheng)(cheng)的(de)(de)限速酶(mei)(mei)。芳(fang)香化(hua)(hua)(hua)酶(mei)(mei)是(shi)屬(shu)于細胞色素(su)(su)P450的(de)(de)一(yi)種復合酶(mei)(mei),可氧化(hua)(hua)(hua)脫(tuo)(tuo)去C19類固醇(chun)(chun)(雄(xiong)烯二(er)酮(tong)和睪酮(tong))的(de)(de)19-甲基,使A環(huan)芳(fang)構化(hua)(hua)(hua),從而轉變(bian)成(cheng)(cheng)C18雌激(ji)素(su)(su)(雌酮(tong)和雌二(er)醇(chun)(chun))。因(yin)此,芳(fang)香化(hua)(hua)(hua)酶(mei)(mei)是(shi)體內(nei)合成(cheng)(cheng)雌激(ji)素(su)(su)的(de)(de)重要酶(mei)(mei)。

實驗原理:

本試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗體(ti)夾心法測(ce)定(ding)標本中(zhong)大鼠(shu)芳(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(ARO)水平。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)(de)大鼠(shu)芳(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(ARO)捕(bu)獲抗體(ti)包(bao)被微孔(kong)板,制成(cheng)固相(xiang)抗體(ti),往包(bao)被的(de)(de)微孔(kong)中(zhong)依(yi)次加入大鼠(shu)芳(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(ARO),再與(yu)HRP標記的(de)(de)檢測(ce)抗體(ti)結合,形成(cheng)抗體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)標抗體(ti)復合物,經過*洗滌后加底(di)物TMB顯色。TMB在HRP酶(mei)的(de)(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色,并在酸的(de)(de)作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)zui終的(de)(de)黃色。顏色的(de)(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)(de)大鼠(shu)芳(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(ARO)呈正相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在450nm波長下測(ce)定(ding)吸光度(OD值),通(tong)過標準曲線計算樣品中(zhong)大鼠(shu)芳(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(ARO)含量。

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操作步驟:

1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9. 測(ce)定:以空(kong)白孔(kong)調零,450nm波(bo)長依序測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度(du)(OD值(zhi))。 測(ce)定應在(zai)加終止液后15分鐘以內進行。

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