常規病理染色實驗代測的樣本包埋與固定

HE染色實驗

HE染(ran)色法，即是蘇(su)木(mu)精-伊紅染(ran)色(se)法(fa)。石蠟切片技術里常用的(de)染(ran)色(se)法(fa)之一 。蘇木精染(ran)液為(wei)堿性(xing)(xing)，主要(yao)使細(xi)胞(bao)(bao)核內(nei)的(de)染(ran)色(se)質(zhi)(zhi)與胞(bao)(bao)質(zhi)(zhi)內(nei)的(de)核糖(tang)體著紫藍色(se)；伊紅為(wei)酸性(xing)(xing)染(ran)料(liao)，主要(yao)使細(xi)胞(bao)(bao)質(zhi)(zhi)和細(xi)胞(bao)(bao)外基(ji)質(zhi)(zhi)中(zhong)(zhong)的(de)成分著紅色(se)。易于被(bei)堿性(xing)(xing)或酸性(xing)(xing)染(ran)料(liao)著色(se)的(de)性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)分別稱為(wei)嗜(shi)堿性(xing)(xing)和嗜(shi)酸性(xing)(xing)；若于兩種染(ran)料(liao)的(de)親和力都(dou)不強(qiang)，則呈中(zhong)(zhong)性(xing)(xing)。一般的(de)組(zu)織變化和組(zu)織產物都(dou)可(ke)以(yi)通過這一染(ran)色(se)法(fa)顯示出(chu)來。是(shi)形態學的(de)染(ran)色(se)方法(fa)。

染色結果：細胞核被蘇(su)木精染(ran)成鮮明(ming)的(de)藍色(se)，軟骨基質、鈣鹽顆(ke)粒呈(cheng)深藍色(se)，粘液呈(cheng)灰藍色(se)。細胞漿被伊(yi)紅(hong)染(ran)成深淺(qian)不同的(de)粉紅(hong)色(se)至(zhi)桃紅(hong)色(se)，胞漿內(nei)嗜酸性顆(ke)粒呈(cheng)反光強的(de)鮮紅(hong)色(se)。膠(jiao)原纖維(wei)呈(cheng)淡粉紅(hong)色(se)，彈力纖維(wei)呈(cheng)亮粉紅(hong)色(se)，紅(hong)血球呈(cheng)橘紅(hong)色(se)，蛋白性液體(ti)呈(cheng)粉紅(hong)色(se)。

樣本包埋(mai)與固定

（1）固定(ding)：根(gen)據(ju)需要(yao)取材(cai)后置(zhi)于福(fu)爾馬林中固定(ding)48小時后；

（2）洗(xi)滌與脫水：將(jiang)固定(ding)后的(de)組織用流水沖洗(xi)，去除(chu)殘留的(de)固定(ding)液和雜質。不同(tong)濃度(du)的(de)乙醇逐級(ji)脫水，50%、70%、85%、95%直至純酒精（無(wu)水(shui)乙(yi)醇），每級2小(xiao)時(shi)。70%乙醇中可長期保存；

（3）透明：50%酒精+50%二甲(jia)苯中(zhong)2小(xiao)時(shi)，純二(er)甲(jia)苯(ben)兩(liang)小(xiao)時(shi)，再一次純二(er)甲(jia)苯(ben)兩(liang)小(xiao)時(shi)；

（4）浸蠟：先把組織(zhi)材料塊放在熔化的石蠟和(he)二甲(jia)苯的等量(liang)混合液浸漬(zi)1～2小時，再先(xian)后移入2個(ge)熔化的石(shi)蠟(la)液中浸漬(zi)各3小時左右；

（5）包(bao)埋：將(jiang)浸好蠟的(de)組(zu)織塊(kuai)放入裝有蠟液(ye)的(de)容器(qi)中，擺好組(zu)織塊(kuai)位置。待石(shi)(shi)蠟凝固后將(jiang)周(zhou)圍(wei)多余的(de)石(shi)(shi)蠟去(qu)除(chu)，準(zhun)備(bei)切片(pian)；

（6）切片：將切片刀(dao)裝在刀(dao)片機的(de)刀(dao)架(jia)上并固定緊，固定蠟(la)(la)塊(kuai)底座或(huo)蠟(la)(la)塊(kuai)，調整蠟(la)(la)塊(kuai)與刀(dao)至合適(shi)位置，刀(dao)刃與蠟(la)(la)塊(kuai)表面呈5度角。調整切片機上的(de)切片厚度為4-7μm，然后切片。

HE染色(se)

（1） 脫蠟：60℃、30min；二(er)甲苯(ben)I 10min、二甲(jia)苯II 10min ；

（2）水化：將脫蠟后的切片(pian)經100%酒精、95%酒精(jing)、85%酒精(jing)、75%酒(jiu)精、雙蒸水各3min ；

（3）將已(yi)入(ru)蒸餾水(shui)(shui)后的切片放入(ru)蘇木(mu)精水(shui)(shui)溶液中染色數分鐘，流水(shui)(shui)沖(chong)洗；

（4）1%鹽(yan)酸酒精(jing)分化(hua)0.5-1min；

（5）流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻(ke)；

（6）碳-酸-鋰(li)飽和水(shui)溶液(ye)反(fan)藍1min后流水沖洗；

（7）入(ru)70％和(he)90％酒精(jing)中脫水(shui)各10min；

（8）入酒精伊(yi)紅(hong)染(ran)色液染(ran)色2-3min；。

（9）脫(tuo)水透明：染色后的切片經純酒精脫(tuo)水，再(zai)經二甲苯(ben)使(shi)切片透明；

（10）封片：將已透明的(de)切片滴上(shang)(shang)中性樹膠，蓋上(shang)(shang)蓋玻片封固。待樹膠略(lve)干后，貼上(shang)(shang)標箋，切片標本就(jiu)可使用(yong)；

圖像采集

通過掃描，采集圖片(pian)。

Masson染色代(dai)測

Masson染(ran)色(se)(se)(se)是(shi)用(yong)于顯示組織中纖維(wei)的(de)染(ran)色(se)(se)(se)方法(fa)之一，用(yong)于膠原纖維(wei)染(ran)色(se)(se)(se)而(er)經(jing)典(dian)的(de)技術(shu)方法(fa)。一般是(shi)用(yong)兩種(zhong)或三(san)種(zhong)陰(yin)離(li)子(zi)染(ran)料混合(he)，膠原纖維(wei)呈(cheng)(cheng)(cheng)藍色(se)(se)(se)，肌(ji)纖維(wei)，胞(bao)質(zhi)，纖維(wei)素 角蛋(dan)白紅細(xi)胞(bao)呈(cheng)(cheng)(cheng)紅色(se)(se)(se)，細(xi)胞(bao)胞(bao)核呈(cheng)(cheng)(cheng)藍褐色(se)(se)(se)。用(yong)來顯示組織中纖維(wei)以及炎性因子(zi)的(de)染(ran)色(se)(se)(se)方法(fa)之一。

常規病理染色實驗代測的樣本包埋與固定