大鼠層粘蛋(dan)白（LN）elisa試劑盒對(dui)于樣品的(de)要求(qiu)有哪些！

檢測范圍： 96T15μg/L -400μg/L，本試劑盒(he)僅供(gong)研究(jiu)使用。

使用目的(de)：本(ben)試劑(ji)盒用于測定大(da)鼠血(xue)清(qing)、血(xue)漿及相關(guan)液(ye)體樣本(ben)中層粘(zhan)連蛋白(LN)含量。

實驗原(yuan)理：本試(shi)劑盒(he)應用(yong)(yong)雙抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)夾心法測(ce)定(ding)標(biao)本中(zhong)大(da)鼠(shu)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)水平(ping)。用(yong)(yong)純化(hua)(hua)(hua)的(de)大(da)鼠(shu)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)包(bao)被微(wei)孔(kong)板，制成(cheng)固相抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)，往包(bao)被單抗(kang)(kang)(kang)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加(jia)入(ru)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)，再與HRP 標(biao)記的(de)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)結(jie)合(he)，形成(cheng)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)-抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)-酶標(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)復合(he)物(wu)，經過洗滌(di)后加(jia)底(di)物(wu)TMB 顯色(se)。TMB 在HRP 酶的(de)催化(hua)(hua)(hua)下轉化(hua)(hua)(hua)成(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)作用(yong)(yong)下轉化(hua)(hua)(hua)成(cheng)zui終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品中(zhong)的(de)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)呈正相關。用(yong)(yong)酶標(biao)儀(yi)在450nm 波長下測(ce)定(ding)吸(xi)光度(du)（OD 值），通過標(biao)準曲線(xian)計算樣品中(zhong)大(da)鼠(shu)層粘(zhan)連(lian)蛋白(bai)(LN)濃度(du)。

標本要求：
1.
標本采(cai)集(ji)后盡早進行(xing)(xing)提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按(an)相關文獻(xian)進行(xing)(xing)，提(ti)(ti)取(qu)后應盡快進行(xing)(xing)實驗(yan)。若不能(neng)馬上進行(xing)(xing)試驗(yan)，可將(jiang)標本放于-20℃保存(cun)，但應避免反復凍融

2.
不(bu)能檢測(ce)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)的稀釋：本試(shi)劑(ji)盒提供原倍標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)一支，用(yong)戶可(ke)按照下列(lie)圖表在(zai)小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀釋。400μg/L 5 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl 的原倍標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)150μl 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)200μg/L 4 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl 的5 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)150μl 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)100μg/L 3 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl 的4 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)150μl 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)50μg/L 2 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl 的3 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)150μl 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)25μg/L 1 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl 的2 號標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)150μl 標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)

2. 加(jia)(jia)樣：分別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不加(jia)(jia)樣品(pin)及酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其余各步操作相同）、標(biao)準孔(kong)、待測樣品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包被板上標(biao)準品(pin)準確加(jia)(jia)樣50μl，待測樣品(pin)孔(kong)中先加(jia)(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀釋度為(wei)5 倍）。加(jia)(jia)樣將樣品(pin)加(jia)(jia)于酶(mei)標(biao)板孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動(dong)混勻。

3.  溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫育30 分鐘(zhong)。

4. 配液：將30 倍濃縮(suo)洗滌液用蒸餾水(shui)30 倍稀釋(shi)后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液體(ti)，甩干，每(mei)孔加滿(man)洗滌液，靜置30 秒后(hou)棄(qi)去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶(mei)：每孔(kong)加入酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外。

7. 溫育：操作(zuo)同(tong)3。

8. 洗滌：操作同5。

9.  顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避光顯(xian)色(se)10 分鐘.

10.  終止(zhi)(zhi)：每孔加(jia)終止(zhi)(zhi)液50μl，終止(zhi)(zhi)反應（此時藍色立轉黃色）。

11.  測(ce)定(ding)：以空白空調零(ling)，450nm 波長(chang)依序測(ce)量各孔的(de)吸光度(du)（OD 值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應在(zai)加終止液后15 分鐘以內進行(xing)。操(cao)作程(cheng)序總(zong)結(jie)：計算(suan)以標(biao)(biao)(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)為橫坐(zuo)標(biao)(biao)(biao)，OD 值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)(biao)(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)(biao)(biao)紙(zhi)上繪出標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線，根據樣品(pin)的(de)OD 值(zhi)由標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線查出相應的(de)濃(nong)度(du)；再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍數；或用標(biao)(biao)(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)與OD 值(zhi)計算(suan)出標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線的(de)直線回歸方程(cheng)式(shi)(shi)，將樣品(pin)的(de)OD 值(zhi)代入方程(cheng)式(shi)(shi)，計算(suan)出樣品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍數，即為樣品(pin)的(de)實(shi)際濃(nong)度(du)。

注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑(ji)不同批號組分(fen)不得混用(yong)。

保(bao)存(cun)條件(jian)及有效期1．試(shi)劑盒保(bao)存(cun)：；2-8℃。2．有效期：6 個月

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