人免疫球蛋白G elisa試劑盒操作中哪部最關鍵

在收集樣(yang)本(ben)(ben)前都(dou)必須有(you)(you)一個完整的(de)計(ji)劃，必須清(qing)楚要檢(jian)(jian)測的(de)成份是否(fou)足(zu)夠穩定。對收集后當(dang)天就進行檢(jian)(jian)測的(de)樣(yang)本(ben)(ben)，及(ji)時儲存(cun)在4℃備用。對于隔天再檢(jian)(jian)測的(de)樣(yang)本(ben)(ben)，及(ji)時分裝后凍(dong)(dong)存(cun)在-20℃備用，有(you)(you)條件的(de)，最好-70℃凍(dong)(dong)存(cun)備用。標(biao)本(ben)(ben)應避免反復凍(dong)(dong)融。

ELISA的(de)(de)(de)(de)基礎是抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)固(gu)相(xiang)化及(ji)抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)記。結合(he)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)仍(reng)保持(chi)其(qi)免(mian)疫學活(huo)(huo)性(xing)，酶(mei)(mei)(mei)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)既保留(liu)其(qi)免(mian)疫學活(huo)(huo)性(xing)，又保留(liu)酶(mei)(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)活(huo)(huo)性(xing)。在(zai)測定時(shi)，受(shou)檢標(biao)本（測定其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)原(yuan)）與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)起反應(ying)。用(yong)洗滌(di)的(de)(de)(de)(de)方法使(shi)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)上(shang)(shang)形成的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)復合(he)物(wu)(wu)(wu)與(yu)(yu)液體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)其(qi)他(ta)物(wu)(wu)(wu)質分開。再加(jia)入酶(mei)(mei)(mei)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)或(huo)(huo)(huo)(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，也通過(guo)反應(ying)而結合(he)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)上(shang)(shang)。此時(shi)固(gu)相(xiang)上(shang)(shang)的(de)(de)(de)(de)酶(mei)(mei)(mei)量(liang)(liang)(liang)與(yu)(yu)標(biao)本中(zhong)受(shou)檢物(wu)(wu)(wu)質的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)呈一(yi)定的(de)(de)(de)(de)比例。加(jia)入酶(mei)(mei)(mei)反應(ying)的(de)(de)(de)(de)底物(wu)(wu)(wu)后，底物(wu)(wu)(wu)被酶(mei)(mei)(mei)催化成為有色(se)(se)產(chan)物(wu)(wu)(wu)，產(chan)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)與(yu)(yu)標(biao)本中(zhong)受(shou)檢物(wu)(wu)(wu)質的(de)(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)直(zhi)接(jie)相(xiang)關，故(gu)可根據呈色(se)(se)的(de)(de)(de)(de)深淺進(jin)行(xing)定性(xing)或(huo)(huo)(huo)(huo)定量(liang)(liang)(liang)分析。由于酶(mei)(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)催化效率很高，間(jian)接(jie)地放大了(le)免(mian)疫反應(ying)的(de)(de)(de)(de)結果，使(shi)測定方法達(da)到很高的(de)(de)(de)(de)敏感度(du)。

操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ug/ml5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
40ug/ml4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
20ug/ml3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
10ug/ml2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
5ug/ml1 號標(biao)準品(pin)150µl 的 2 號標(biao)準品(pin)加入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 2 0 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 2 0 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
 重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
     10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔(kong)(kong)調零，450nm 波長依序測量(liang)各孔(kong)(kong)的吸光(guang)度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行(xing)。