Real -Time PCR即(ji)實時監測(ce)PCR擴增(zeng)產物并進(jin)(jin)行(xing)解(jie)析(xi)的(de)方法，它是在PCR反(fan)應(ying)體系中加(jia)入熒(ying)光(guang)物質，并通(tong)過Real -Time PCR檢測(ce)系統對(dui)PCR反(fan)應(ying)進(jin)(jin)程中的(de)熒(ying)光(guang)信號強度進(jin)(jin)行(xing)實時監測(ce)，最終對(dui)實驗數(shu)據進(jin)(jin)行(xing)分析(xi)處理的(de)方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公(gong)司推(tui)出(chu)以(yi)來(lai)，廣泛(fan)應(ying)用于生物研(yan)究(jiu)的(de)各個領域(yu)。目(mu)前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種(zhong)。

PCR技術服務主要儀器及耗材：

旋渦振(zhen)蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產品(pin)

手(shou)握(wo)式電動勻漿(jiang)機：德(de)國FLUKO公司產品(pin)

低溫冷凍離心機：Sigma（3K15）公司產品

Real-time檢(jian)測(ce)儀：ABI（ABI-7300）公司產品

超(chao)純水分離系統(tong)：美國LABCONCO公(gong)司(si)

離心(xin)管及10μL、200μL、1000μL槍頭(tou)等常(chang)規(gui)耗(hao)材均為國產；RNA提取過程中所需(xu)的離心(xin)管、槍頭(tou)等耗(hao)材經(jing)過0.1%的DEPC水浸(jin)泡過一夜，121℃滅菌30min，烘(hong)干后備用。

PCR技術服務實驗室試劑的操作：

1)所用的(de)所有溶(rong)液都應該(gai)沒(mei)有核酸(suan)和(或)核酸(suan)酶(DNase和RNase)污染。

2)所有(you)PCR試劑(ji)中使用的水都應(ying)該是(shi)高(gao)質量的-新鮮蒸(zheng)餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并(bing)且(qie)是(shi)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)。

3)在(zai)20℃到25℃貯存(cun)的試劑建議加點像疊氮(dan)鈉一類的抗微生(sheng)物劑，在(zai)擴(kuo)增(zeng)試劑或(huo)樣品制(zhi)備(bei)試劑中加入(ru)0.025%的疊氮(dan)鈉不抑制(zhi)擴(kuo)增(zeng)反應。

4)所用試(shi)(shi)劑都(dou)應該以大體積配制，實驗一下(xia)看(kan)試(shi)(shi)劑是否(fou)滿(man)意，然后分裝成僅(jin)夠一次(ci)使用的量進(jin)行貯(zhu)存。

5)所有試劑和(he)(he)樣品準備過(guo)程中都要使用(yong)一次性滅菌的瓶(ping)子(zi)和(he)(he)管子(zi)。

6)新(xin)配制的試劑在用(yong)于(yu)準(zhun)備新(xin)的標本之前應(ying)該加以檢驗。

7)樣品準備(bei)和前PCR區所使用的移液管(guan)在不使用時都(dou)應該(gai)小(xiao)心保存(cun)。

本程序適用于自動PCR操作，可適用于大多數情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質量的dNTPs，這一點非常重要。dNTPs經反復化凍后會發生降解，因此應分成小份保存。應注意混合物中四種dNTP的量要相等。

所有產品僅供科研使用，不得用于食用，醫療等其它用途(tu)。